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菌液PCR

jiong jiong 发表于2026-04-06 15:54:15 浏览15 评论0

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适用于构建质粒初步验证。

  1. 选择合适的PCR引物,要求一条引物在骨架上,一条引物在插入片段上(或者两条引物在骨架上,且位于插入位置两侧)。

  2. 配置PCR体系(10 uL)

  3. 准备同样数量的两组PCR管,一组加入PCR混合液,一组加入100 uL LB培养基

  4. PCR30个循环,退火温度和延伸时间依据插入片段设定。

  5. 跑胶观察。

  6. 正确的菌液进行小摇。后续送菌液或者小提。

PS:

对于一条引物在骨架上,一条引物在插入片段上,理应只有一条带或者没有。

对于两条引物在骨架上,且位于插入位置两侧的,理应最亮的带是目的条带。