适用于构建质粒初步验证。
选择合适的PCR引物,要求一条引物在骨架上,一条引物在插入片段上(或者两条引物在骨架上,且位于插入位置两侧)。
配置PCR体系(10 uL)
准备同样数量的两组PCR管,一组加入PCR混合液,一组加入100 uL LB培养基
PCR30个循环,退火温度和延伸时间依据插入片段设定。
跑胶观察。
正确的菌液进行小摇。后续送菌液或者小提。
PS:
对于一条引物在骨架上,一条引物在插入片段上,理应只有一条带或者没有。
对于两条引物在骨架上,且位于插入位置两侧的,理应最亮的带是目的条带。