今日事

1. 流式分选465-466（已完成）

   每个收回约5万5的细胞，转染效率在30%左右，每管分成三份，96孔上铺两份，剩余1份铺4个10 cm皿。多余细胞煮基因组。

2. PCR 465、466

3. 转化PJ391

今日事

1. 电转PFF（已完成）

   转染编号465-466

2. 统计3rd NGS数据

3. 设计TSS-HI和Lonza 4D电转液配制方案

4. 设计新质粒

生工订单2120910840：

445测序正确质粒：445-1、445-4、445-5

446测序正确质粒：445-3

已申请返样

今日事

1. 对不同GFP变体进行规整。发现PJ395和PJ396有问题，需要重新构建。

2. 复苏Bama31-7 P41管，1：2复苏两孔6孔板孔。

1. 用PBS当回收液，PCR结果优于DMEM。

2. 细胞裂解液，每5000个细胞加5 uL，5000个细胞以下加5 uL。

3. 5000个细胞及以上的粗裂解产物，第一轮反应1 uL当模板即可；如果是用EB稀释了1倍，第一轮反应2 uL当模板。

今日事

1. 过流式（PFF 0408转染），铺板

2. PCR pT6片段

3. 测试流式细胞5000，10000，15000粗裂解产物一轮PCR结果

4. 胶回收pT7、pT8和pT9片段

5. 送库2026a2

6. 送纳米孔流式169~183、WT101、WT103和WT104
   

PE150双端测序：测序一次150 bp

上游测序：23（上游通用接头）+ 127

下游测序：130 + 20（下游通用接头）

今日事

1. PCR 402-全。

2. gibson PJ402，pT3。转化涂板。

3. 建库2026a2

4. 电转PFF

5. 菌P pT1和pT2，送测序
   

所需试剂：H9酶。

第一次PCR体系如下：

    H9 mix:        10 uL

    F:                  0.8 uL