1. 用XL10-Gold转化PJ449-2、PJ450-1、PJ98、PJ100和PJ147.

2. 传代293T 1盘24孔板（明转染PJ448、PJ449和PJ450），1盘12孔板（保种）

3. 转染PJ425、PJ427、PJ428、PJ429和PJ431，测试质粒是否有效。
   

冲洗管路：取干净的流式管，加入

硬件启动：稳压电源-气泵-计算机(进桌面,

1. 查找小鼠、绿猴的spcas9好用SgRNA

2. 查找groupI、groupII的核酶
   

466-7、8、11、13、15是TKO敲除，466-3的CMAH不确定是否敲除

3、8的状态较差，13和15的状态好些，所以可以分成两组（3、7，13）和（8，11，15）

今日事

1. 流式分选465-466（已完成）

   每个收回约5万5的细胞，转染效率在30%左右，每管分成三份，96孔上铺两份，剩余1份铺4个10 cm皿。多余细胞煮基因组。

2. PCR 465、466

3. 转化PJ391

今日事

1. 电转PFF（已完成）

   转染编号465-466

2. 统计3rd NGS数据

3. 设计TSS-HI和Lonza 4D电转液配制方案

4. 设计新质粒

生工订单2120910840：

445测序正确质粒：445-1、445-4、445-5

446测序正确质粒：445-3

已申请返样

今日事

1. 对不同GFP变体进行规整。发现PJ395和PJ396有问题，需要重新构建。

2. 复苏Bama31-7 P41管，1：2复苏两孔6孔板孔。

1. 用PBS当回收液，PCR结果优于DMEM。

2. 细胞裂解液，每5000个细胞加5 uL，5000个细胞以下加5 uL。

3. 5000个细胞及以上的粗裂解产物，第一轮反应1 uL当模板即可；如果是用EB稀释了1倍，第一轮反应2 uL当模板。