二代测序引物设计

PE150双端测序：测序一次150 bp

上游测序：23（上游通用接头）+ 127

下游测序：130 + 20（下游通用接头）

重叠部分：20 - 50 bp，建议30 - 50 bp

从基因组上PCR：207 - 227 bp（不加通用接头的时候）

加上接头：250 - 270 bp

第一次跑胶大小在200 - 300 bp

第二次PCR：386 - 406 bp

第二次跑胶大小在300 -400 bp

NCBI primer-blast 范围434 bp，从sgRNA5'端往上拉207，再往下拉434 bp，prime大小在207-227之间，sgRNA得在中间位置被包含