二代测序自建库

所需试剂：H9酶。

第一次PCR体系如下：

    H9 mix:        10 uL

    F:                  0.8 uL

    R:                  0.8 uL

    template       2 uL

    ddH₂O          6.4 uL

程序：

    94℃ 3min; 94℃ 25s, 65℃ 25s, 72℃ 5s/ 30 cycles; 72℃ 5min, 12℃ ∞

第二次PCR体系如下：

    H9 mix:        10 uL

    primer          0.9 uL

    template       1 uL

    ddH₂O          8.1 uL

程序：

    94℃ 3min; 94℃ 25s, 55℃ 25s, 72℃ 5s/ 8 cycles；94℃ 25s, 65℃ 25s, 72℃ 5s/ 8 cycles; 72℃ 5min, 12℃ ∞

PS：

退火温度需要提前测试。建库最后一步回收时，每孔取3 uL，条带浅的适量增加。